Введение

          В последние годы был проведен математический анализ структуры генетического кода  [1].  Этот анализ основывался на исследовании некоторых необычных способов записи структурных генов. Структурные гены - гены кодирующие белки, представлены на одной из цепей двухцепочечной ДНК и записываются 4-х буквенным алфавитом:  A,T,C,G -  это нуклеотиды аденин, тимин, цитозин и гуанин соответственно. Устойчивость ДНК  поддерживается комплементарными связями, когда  А  в одной цепи ДНК связывается только с  Т  из  другой цепи, а  С - только  с  G.  Эксперименты показали, что кодировка белков осуществляется через тройки нуклеотидов:  AAA,AAT,AAC,...GGG,   которые называются триплетами или кодонами и являются единицами  генетического кода.  Всего имеем 64 триплета. Оказалось, что лишь  61 триплет из них кодирует  одну из 20-и белковых единиц - аминокислот, а триплеты  TAA,TAG,TGA   не кодируют никакой аминокислоты.  Причем оказалось, что некоторые аминокислоты могут кодироваться одним триплетом,  а другие большим числом триплетов,  вплоть до 6-и. Такая неоднозначность была названа вырожденностью кода. Сам генетический код (см. табл. 1 из  [1]) может рассматриваться как оператор преобразования между генами и белками или точнее между кодонными семействами и 20-ю аминокислотами. Перечень аминокислот в стандартом виде (трехбуквенные сокращения) приводится ниже в табл. 1.  Указанный код называют стандартным - (первоначальное название - универсальный), которым записано подавляющее большинство структурных генов, известных в настоящее время. Через 13 лет (в 1979г.) после того, как этот код был окончательно установлен, было показано, что код в природе не один. На сегодня известно уже более 10 нестандартных кодов для некоторых организмов. Нами были проанализированы ряд таких кодов  [2].

          Необычный способ записи генов, о котором говорилось выше, состоит в том, что один и тот же участок цепи ДНК, кодирующий белок, может читаться со сдвигом фазы на  +1  либо  -1  нуклеотид.  Иными словами один и тот же указанный участок может кодировать два и более белков.  Такие гены были названы перекрывающимися. Отметим, что как показывают эксперименты, такое чтение оказывается разрешенным лишь в некоторых случаях, а в подавляющем большинстве случаев существует запрет на указанные альтернативные чтения. Этот запрет состоит в том, что указанные сдвиги приводят к совершенно иным последовательностям кодонов отличным от исходной последовательности (когда сдвигов нет). Но было установлено, что в подобных альтернативных последовательностях непременно возникают какие-либо кодоны из трех:  TAA, TAG, TGA  указанных выше (так устроен ген кодирующий белок, или так выбраны соответствующие кодировки аминокислот вследствие вырожденности кода).

          1      2      3          80

        Met    Met    Met   ...  Arg

W₁(80) Tyr    His    Asn        Ser

       TATG   CATG   AATG       TCGN

          1      2      3          80

        Met    Met    Trp   ...  Arg

W₂(80)   Trp    Cys    Gly        Gly

        ATGG   ATGY   TGGN       ZGGN

          1      2      3          35

        Met    Met    Trp         Arg

W₃(35)  ATG    ATG    TGG    ...  AGX

       GTA    MTA    YAC         NTC

       Met    Ile    His         Leu

          1      2      3          52

        Met    Trp    Phe         Arg

W₄(52)  ATG    TGG    TTT    ...  CGC

        TAC    ACC    AAA         GCG

        His    Pro    Lys         Ala

          1      2      3          196

        Met    Met    Met         Arg

W₅(196) ATG    ATG    ATG    ...  AGG

         ACC    ACA    ACG         CCT

         Pro    Thr    Ala         Ser

Рис. 1.  Описание структуры множеств  W₁-W₅.

                                      Приведены  по  4-е  э.п.  в каждом из множеств.

Роль названных трех кодонов одинакова - они останавливают (блокируют) белковый синтез, который происходит (по тексту гена). Иными словами белок при альтернативном чтении не синтезируется. Оказалось, что лишь для перекрывающихся генов такого запрета не существует. Впервые этот эффект был установлен в 1976 году при чтении первого целого генома - вируса бактерии ФХ 174 [3].  ДНК такого вируса оказалась кольцевой и одноцепочечной и содержащей 5386 нуклеотидов. Одно из самых длинных перекрытий, обнаруженных к настоящему времени, относится к ДНК вируса  GSHV [4]  и содержит около 1300 нуклеотидов, а полный размер всех перекрытий равен 1704 нуклеотида или более половины от размера всей ДНК  (одна цепь содержит   - 3311 нуклеотида).

       Названные два генома содержат случаи перекрытий генов, принадлежащих одной цепи  ДНК.   Таких случаев 2:   сдвиг  на   +1  либо  -1 нуклеотид относительно исходного гена.  Позднее были установлены перекрытия  двух генов, принадлежащих различным цепям ДНК,  которые называются  + цепью  и   - цепью  ДНК.  При этом следует отметить, что чтение гена (и последовательностей триплетов) происходит слева направо для  + цепи ДНК  и  справа налево для  - цепи ДНК.  Случаев перекрывания при этом будет 3:  сдвиг  на   +1,   0   либо   -1  нуклеотид    гена  из   - цепи относительно гена из  + цепи.  Таким образом, полное число случаев перекрытий пар генов равно 5. Экспериментальные данные по всем таким случаям представлены на рис. 1 из  [1].

2. Элементарные перекрытия.

     Основные результаты из  [1, 2]  были получены на основе математического анализа множеств элементарных перекрытий - э.п. Таких - множеств  5:  W₁-W₅,  каждое  из  которых соответствует одному из  5-и указанных случаев перекрывания.  Э.п. - это перекрытие соответствующее одиночным аминокислотам. Поскольку здесь есть неопределенность: сколько нуклеотидов может перекрываться  1, 2 либо 3  (если возможно)  нуклеотида,  то под  э.п. понимаем перекрывание максимально возможного числа нуклеотидов:  это  3 нуклеотида  для случая  4  и  2  для всех остальных случаев перекрытий. На рис.1 дано краткое представление  э.п.: представлены лишь по 4  э.п. для каждого из множеств  W₁-W₅. Опишем первые э.п. в этих множествах. Для W₁ первое э.п. соответствует перекрытию кодона Met и кодо-на  Tyr, общая пара  нуклеотидов  АТ,  сдвиг между кодонами равен -1 нуклеотид. Для  W₂  первое э.п. соответствует перекрытию  Met  и кодона  Trp,  общая  пара нуклеотидов  TG, сдвиг между кодонами равен +1 нуклеотид. В отличие от  W₁ и  W₂ э.п. из  W₃-W₅ соответствуют разным цепям ДНК.

     Верхний кодон в этих э.п.  соответствует  + цепи ДНК и чтение кодона идет слева направо, а нижний кодон соответствует  - цепи ДНК  и чтение кодона идет справа налево. Для    W₃  первое э.п.  соответствует перекрытию кодона  ATG ( Met )   и кодона Met , который справа налево читается как ATG.

Таблица 1

Число элементарных перекрытий  (э.п.)

в 20-и подмножествах каждого из множеств W₁-W₅

Сдвиг между кодонами, принадлежащих разным цепям ДНК, составляет -1 нуклеотид.  Нуклеотиды из пары  АТ  в + цепи  комплементарно связаны с нуклеотидами  ТА  из  - цепи ДНК: это связи  АТ  и  ТА.  Для  W₄  первое э.п.  соответствует перекрытию кодона  Met  и кодона   His(САТ). Кодоны берутся из разных цепей ДНК и сдвиг между кодонами отсутствует.  Перекрытию соответствуют  3  комплементарные связи:  АТ,ТА,GC.  Для  W₅  первое э.п.  соответствует перекрытию кодона  Met  и  кодона  Pro(CCA).  Сдвиг между кодонами из разных цепей ДНК  составляет  +1 нуклеотид, в перекрытии  2 комплементарные связи  ТА,GC.

     Полный набор  э.п.  в каждом из множеств указывается в скобках: для  W₁  и W₂  это 80, для  W₃  - 35,  для   W₄ - 52,   для   W₅ - 196. В Приложении приводится полный перечень этих множеств, в которых  приведены ряд сокращений. Это  N:A,C,T,G; Y:T,C; X:A,G; Z:A,C; I:T,G.   Порядок следования кодонов соответствует левому столбцу таблицы 1:  Met, Trp, Phe, … Arg. Отметим, что в полном представлении множества   W₅  фактическое число э.п. на 5 превышает - 196. Речь идет о некоторых перекрытиях для трех аминокислот:  Gly, Ser, Arg. Для  Gly  имеем два э.п.  с номерами  144.1 и  144.2  у которых как в верхней, так и в нижней позициях одни и те же аминокислоты:    Gly  и   Ser  соответственно. Такое оказалось возможным благодаря нерегулярности кодонного семейства  Ser:   в одном из названных э.п. использован кодон  Ser  из набора  TCN, а в другом - из набора  AGY.    Аналогичная картина наблюдается в трех парах э.п. :  156.1  и  156.2,  157.1  и  157.2,   164.1  и  164.2,  у каждой из которых участвуют кодоны семейства  Ser, а также кодон из наборов  Arg: CGN  или  AGX.  Кодоны из  наборов  Ser и Arg  присутствуют также в паре  э.п.  188.1  и 188.2.   В связи с такой особенностью первые 3 цифры  э.п.  в 5-и указанных парах одинаковы и будем полагать (в дальнейшем анализе) что подобные пары соответствуют одному э.п. Это объясняется тем, что главный  анализ относится к анализу аминокислот в э.п., а в каждой из  названных пар аминокислоты  в перекрытиях одинаковы.

3. Анализ множеств элементарных перекрытий.

     В полном представлении множеств  W₁-W₅  э.п.  приведены последовательно в подмножествах, каждое из которых отличается от другого различием аминокислот в верхних позициях. Поэтому число подмножеств в каждом из множеств  W₁-W₅  равно 20, а число э.п. в каждом из подмножеств указывается в скобках перед первым э.п. соответствующего подмножества. Эти 100 чисел -   - выделены также в таблице 1.

  Отметим некоторые особенности множеств  W₁-W₅.  Все эти множества, кроме  W₄, содержат самоперекрытия, это когда одна и та же аминокислота присутствует как в верхней, так и в нижней строке. При этом оказалось, что в самоперекрытиях участвуют все аминокислоты кроме трех:  Trp, Gln, Glu,  т.е.  17 аминокислот.  Причем это участие может быть в трех множествах: это  Pro, Gly, Leu -   в   W₁, W₂,  W₅  либо в двух множествах:  это  Phe, Lys   в    W₁,  W₂,   а также  Tyr, Ile, Ala, Arg  в  W₃,  W₅.  Кроме того имеют место самоперекрытия для отдельно взятых множеств: это  His, Asn, Asp, Cys, Val, Thr, Ser   в   W₅,  а   Met   в   W₃.

     Сравним численность всех э.п. для одной и двух цепей ДНК.  Формальное сравнение это  160  и  283,  а фактическое  - это  80  и  283  т.е. число  э.п. для двух цепей ДНК более чем в 3,5 раза больше. Анализ этого феномена обсуждается в дальнейших публикациях. Покажем, что множества   W₁ и  W₂  фактически одинаковы; их отличает только перестановка аминокислот в строках. Например, э.п. с номером  1  из  W₁  адекватно  э.п. с номером  7  из  W₂.  Для сравнения укажем, что в множествах  W₃-W₅  такого не наблюдается: ни один э.п.  в этих множествах не может быть получен с помощью простой перестановки аминокислот в каком-либо  э.п.,  принадлежащем другому множеству.  Иными словами  W₃-W₅  содержат  э.п.  по существу различающиеся, в отличие от э.п.  из  W₁,  W₂.   Возникает вопрос, зачем тогда нужны 2 множества   W₁ и  W₂?  Дело в том, что происхождение этих множеств связана с решением конкретной задачи (такая задача ставилась для каждого множества  W₁-W₅): сформировать на основе множества э.п. все возможные наборы перекрытий или из множеств э.п. построить множества для перекрывания двух, трех и более аминокислот. Оказалось, что при такой сборке решения получились разными. Суть этого различия укажем кратко.  При использовании э.п.  из   W₁  в верхней строке могут быть получены последовательности аминокислот с любыми их сочетаниями  [6].  При использовании э.п. из  W₂  имеет место ограничение  [7]: невозможно получить аминокислотные последовательности,  содержащие хотя бы  одну  из 5-и пар аминокислот: MetMet, MenAsn, MetLys, MetIle, MetThr.  Решение указанной задачи сборки э.п. для всех множеств  W₁-W₅  составляет основу теоремы для генетического кода  [1].  Отметим, что парные генетические перекрытия могут быть исследованы при решении задачи сборки э.п.,  принадлежащих одному множеству. При изучении перекрытий трех, четырех, пяти и шести генов могут быть использованы суперпозиции э.п.  из двух, трех, четырех и пяти различных множеств э.п. соответственно. В этом смысле задача сборки имеет более широкий смысл, чем сборка э.п. из одного множества.   

     Обратимся к таблице 1, где представлены численные значения э.п. ,   где   - номер подмножества,   - номер случая перекрытия (или номера множеств   W₁-W₅ ).  Первое, что следует сказать состоит в том, что для всех  ,     имеем , т.е. для каждой из 20-и аминокислот существует хотя бы одно э.п. по какому-либо из 5-и способов перекрытия. Таким образом, ни для какого-либо из 100 значений   нет нуля; это важно для кода  , ориентированного на множественные перекрытия [1].  Минимальное значение    наблюдается только в множествах  W₂,  W₃,  W₄,  для  W₁  имеем  ,  для  W₅ - . Число подмножеств для которых    равно 12: одно для  W₂,  3  для   W₄  и   8  для   W₃.   Максимальное значение      соответствует  подмножествам  Ser (W₂, W₅),   Leu (W₁, W₃).   Значение    для  W₄  соответствует  6-и подмножествам:  Arg, Ser, Gly, Ala, Thr, Val. Максимальное значение из 100 чисел     соответствует  Ser (W₅)   и равно 18. Таким образом оказалось, что для    не существует ни одной кодировки,  которая содержала бы  э.п.  со всеми 20-ю аминокислотами. Указанное значение    соответствуют э.п.  для  Ser со всеми аминокислотами,  кроме Phe и Ile.

     Полное число э.п. для множеств  W₁-W₅  равно 443.  Среднее значение - 22, минимальное соответствует  Trp,  и равно  11, а максимальное -  Ser,  и равно - 39. Представим сжатое описание всех э.п. На рис. 2 по оси абсцисс указывается номер аминокислоты из верхней строки в э.п., по оси ординат - номер аминокислоты из нижней строки в э.п. Число возможных позиций (клеток) равно 400. Ясно, что для 443 э.п. некоторые из позиций должны быть заняты э.п., принадлежащим различным множествам. Такие позиции указаны 16-ю двухзначными числами 12, 14, … 75, позиций подобного рода 113. Кроме того 182 позиции заняты числами 1-5, которые соответствуют э.п. из множеств  W₁-W₅. Таким образом, из 400 возможных позиций только 295  (113+182) заняты какими-либо э.п., а оставшиеся 105 позиций являются свободными. Иными словами э.п. из всех множеств  W₁-W₅  не содержат все возможные перекрывания для любых пар аминокислот. Максимальное число свободных позиций равно 10 и соответствует  Trp, а минимальное число - 0 и соответствует  Ser,  среднее число подобных позиций чуть более 5-и (105/20).     Иными словами каждая аминокислота имеет в среднем 15  э.п. для всех множеств  W₁-W₅.  Максимально это число только для  Ser - 20 или только  Ser содержит э.п. с каждой из 20-и аминокислот, если рассматривать все 5 способов перекрываний.

Рис. 2

Представление  443  э.п.,  которые содержатся  в  множествах  W₁-W₅.

     Рассмотрим позиции, которые соответствуют 2-м и более э.п.  Имеем 4 позиции, каждая из которых содержит по 4 э.п.: две позиции 65 - это э.п. из множеств с номерами 1, 2, 3, 5 и две позиции 75 - это э.п. из множеств с номерами 1, 2, 4, 5.  Кроме того, имееем 82 позиции занятых э.п. из двух множеств;  таких пар э.п. всего 7 групп из которых: 10 позиций  12(12 - это э.п. из множеств  W₁,  W₂),  5 позиций  14,  19 позиций  15,  5 позиций  24,  18 позиций  25,  12 позиций  35,  13 позиций  45. Позиции, занятые тремя э.п. обозначены также двухзначным числом. Номера трех множеств  W, которым принадлежат такие э.п. указаны в скобках. Всего подобных позиций 27, они составят тройки э.п. из 7 групп: это 2 позиции  16 (1, 2, 4),  7 позиций  17 (1, 2,5),  1 позиция  18 (1, 3,5), 5 позиций э.п.  19 (1, 4,5), 1 позиция  28 (2, 3, 5), 5 позиций  29  (2, 4, 5) и  6 позиций  39 (3, 4, 5). На рис. 2 можно выделить две квадратные области, все позиции которых содержит э.п. (нет пустых позиций). Это область из 25 позиций для э.п. с номерами  4-8  (Tyr-Cys) и область для э.п. с номерами  13-20 (Val-Arg). Последняя область содержит 64 позиции и соответствует всем э.п. только для аминокислот с кодировками от 4-х до 6-и триплетов; использованы все аминокислоты с подобными кодировками. Первая область принадлежит лишь э.п. для пяти аминокислот  (Tyr, His, … Cys)из 9-и возможных, каждая из которых кодируется двумя триплетами.

4. Применение множеств.

1.     Множества  W₁-W₅  впервые были использованы при доказательстве теоремы для генетического кода  [1].  Оказалось, что при использовании   почти для любых последовательностей аминокислот могут существовать перекрытия для каждого из 5-и случаев. Исключение составят лишь последовательности, содержащие хотя бы одну из 16 пар аминокислот, которые были установлены.

2.     Для анализа вопроса  о произвольности «выбора» генетического кода [1] были рассмотрены ряд гипотетических кодов отклоненных от   вследствие перестановок некоторых кодонов. Выбор этих перестановок не был случайным,  а опирался на анализ всех  100 подмножеств  для множеств  W₁-W₅.  Было установлено, что одиночная перестановка может привести к увеличению числа указанных выше пар аминокислот не более чем на 12 (т.е. к увеличению до 28 пар). Анализировались также гипотетические коды с множеством перестановок, для которых указанное число пар может быть увеличено почти на порядок.

3.     На основе коррекции множеств W₁-W₅ изучались вопросы применения указанной теоремы для природных нестандартных кодов  [2]. Анализ всех таких кодов показал, что они отличаются от   небольшим числом перестановок кодонов. Поэтому для анализа каждого из таких кодов требуется лишь относительно небольшая коррекция множеств  W₁-W₅. Такой подход позволил получить решения для ряда нестандартных кодов, в том числе для кода, которым записываются белки в митрохондрии человека  [2].

4.     Ограниченный набор э.п. был изучен нами ранее при анализе нерегулярностей кодонных семейств  Leu, Ser, Arg [7]. При этом рассматривались только перекрытия генов из одной цепи ДНК. Таких э.п. оказалось всего 12 (см. табл. 1 из [7]). Анализ этих э.п. показал их возможную роль в расширении протяженности перекрытий как двух, так и  трех генов в одной цепи ДНК (см. рис. 2 из  [7]).

       Автор благодарен О.Н.Козловой и Т.И.Кругловой за помощь в подготовке препринта.

     СПИСОК  ЛИТЕРАТУРЫ

1.     Н.Н.Козлов. Теорема для генетического кода. ДАН. 2002.  Т. 382.  № 5.

     С. 593-597.

2.     Н.Н.Козлов. Применение теоремы для генетического кода. ДАН. 2004.

     T. 396.  № 6.  С. 740-745.

3.     Sanger F., Coulson A.R., Friedmann et al. // J. Mol. Biol. 1978. V. 125.

     P. 225-246.

4.     Seeger C., Ganem D., Varmus H.E. // J.Virol. 1984. V. 51. P. 367-375.

5.     Н.Н.Козлов. К вопросу о произвольности «выбора» генетического кода. ДАН. 1999.  Т. 369.  № 4. С. 553-556.

6.     Н.Н.Козлов. Анализ полного множества перекрывающихся генов. ДАН.

     2000. Т. 373. № 1.  С. 108-111.

7.     Н.Н.Козлов. Перекрывающиеся гены и генетический код. ДАН. 1997.

     Т. 355.  № 6.  C. 830-833.

     ПРИЛОЖЕНИЕ 

W₁

W₂

W₃

W₄

 1     Met        2     Trp

Met    ATG       Trp    TGG

(1)    TAC       (1)    ACC

       His              Pro

        1                2

 3     Phe   Phe         4     Tyr   Tyr  

Phe    TTT   TTC        Tyr    TAT   TAC

(2)           AAA   AAG        (2)    ATA   ATG

       Lys   Glu               Ile   Val

        3     4                 5     6

 5     His   His         6     Asn   Asn

His    CAC   CAT        Asn    AAT   AAC

(2)                   GTG   GTA        (2)    TTA   TTG

Val   Met               Ile   Val

        7     8                9     10

 7     Asp   Asp         8     Cys   Cys

Asp    GAT   GAC        Cys    TGT   TGC

(2)                   CTA   CTG        (2)    ACA   ACG

Ile   Val               Thr   Ala

       11    12                13    14

 9     Gln           10     Lys   Lys      

Gln    CAX           Lys    AAA   AAG

(1)                   GTY           (2)    TTT   TTC

Leu                  Phe   Leu

       15                   16    17

11     Glu   Glu       12    Ile   Ile   Ile

Glu    GAA   GAG       Ile   ATA   ATC   ATT

(2)                   CTT   CTC       (3)   TAT   TAG   TAA

Phe   Leu             Tyr   Asp   Asn

       18    19              20    21    22

13     Val   Val   Val   Val

Val    GTT   GTC   GTA   GTG

(4)    CAA   CAG   CAT   CAC

Asn   Asp   Tyr   His

       23    24    25    26

14     Pro   Pro   Pro

Pro    CCC   CCA   CCI

(3)    GGG   GGT   GGZ

       Gly   Trp   Arg

       27    28    29

15     Thr   Thr   Thr   Thr

Thr    ACT   ACC   ACA   ACG

(4)    TGA   TGG   TGT   TGC

       Ser   Gly   Cys   Arg

       30    31    32    33

16     Ala   Ala   Ala   Ala

Ala    GCT   GCC   GCA   GCG

(4)    CGA   CGG   CGT   CGC

       Ser   Gly   Cys   Arg

       34    35    36    37

17     Gly   Gly   Gly   Gly

Gly    GGT   GGC   GGA   GGG

(4)    CCA   CCG   CCT   CCC

       Thr   Ala   Ser   Pro

       38    39    40    41

18     Ser   Ser   Ser   Ser

Ser    TCI   TCC   AGT   AGC

(4)    AGZ   AGG   TCA   TCG

       Arg   Gly   Thr   Ala

       42    43    44    45

19     Leu   Leu   Leu

Leu    CTT   CTC   YTG

(3)    GAA   GAG   XAC

       Lys   Glu   Gln

       46    47    48

20     Arg   Arg   Arg   Arg

Arg    CGT   CGC   ZGA   ZGG

(4)    GCA   GCG   ICT   ICC

       Thr   Ala   Ser   Pro

       49    50    51    52

W₅

1                        Met    Met    Met    Met

Met    ATG    ATG    ATG    ATG

(4)                        ACC    ACA    ACG    ACT

Pro    Thr    Ala    Ser

         1      2      3      4

 2     Trp    Trp    Trp    Trp

Trp    TGG    TGG    TGG    TGG

(4)                        CCC    CCA    CCG    CCT

Pro    Thr    Ala    Ser

         5      6      7      8

 3     Phe    Phe    Phe    Phe    Phe

Phe    TTT    TTT    TTT    TTC    TTC

(5)                        AAC    AAA    AAG    AGG    AGZ

Gln    Lys    Glu    Gly    Arg

         9     10     11     12     13

 4     Tyr    Tyr    Tyr    Tyr

Tyr    TAT    TAT    TAT    TAT

(8)                        TAT    TAC    TAA    TAG

Tyr    His    Asn    Asp

        14     15     16     17

       Tyr    Tyr    Tyr    Tyr

       TAC    TAC    TAC    TAC

        TGT    TGG    TGA    TGC

        Cys    Gly    Ser    Arg

        18     19     20     21

 5     His    His    His    His

His    CAT    CAT    CAT    CAT

(8)                        TAT    TAC    TAA    TAG

Tyr    His    Asn    Asp

        22     23     24     25

       His    His    His    His

       CAC    CAC    CAC    CAC

        TGT    TGG    TGA    TGC

        Cys    Gly    Ser    Arg

        26     27     28     29

 6     Asn    Asn    Asn    Asn

Asn    AAT    AAT    AAT    AAT

(8)                        TAT    TAC    TAA    TAG

Tyr    His    Asn    Asp

        30     31     32     33

       Asn    Asn    Asn    Asn

       AAC    AAC    AAC    AAC

        TGT    TGG    TGA    TGC

        Cys    Gly    Ser    Arg

        34     35     36     37

 7     Asp    Asp    Asp    Asp

Asp    GAT    GAT    GAT    GAT

(8)                        TAT    TAC    TAA    TAG

Tyr    His    Asn    Asp

        38     39     40     41

       Asp    Asp    Asp    Asp

       GAC    GAC    GAC    GAC

        TGT    TGG    TGA    TGC

        Cys    Gly    Ser    Arg

        42     43     44     45

 8     Cys    Cys    Cys    Cys

Cys    TGT    TGT    TGT    TGT

(8)                        CAT    CAC    CAG    CAA

Tyr    His    Asp    Asn

        46     47     48     49

       Cys    Cys    Cys    Cys

       TGC    TGC    TGC    TGC

        CGT    CGG    CGC    CGA

        Cys    Gly    Arg    Ser

        50     51     52     53

 9     Gln    Gln    Gln    Gln

Gln    CAA    CAA    CAA    CAA

(8)     TTT    TTA    TTG    TTC

        Phe    Ile    Val    Leu

        54     55     56     57

       Gln    Gln    Gln    Gln

       CAG    CAG    CAG    CAG

        TCC    TCA    TCG    TCT

        Pro    Thr    Ala    Ser

        58     59     60     61

10     Lys    Lys    Lys    Lys

Lys    AAA    AAA    AAA    AAA

(8)                        TTT    TTA    TTG    TTC

Phe    Ile    Val    Leu

        62     63     64     65

       Lys    Lys    Lys    Lys

       AAG    AAG    AAG    AAG

        TCC    TCA    TCG    TCT

        Pro    Thr    Ala    Ser

        66     67     68     69

11     Glu    Glu    Glu    Glu

Glu    GAA    GAA    GAA    GAA

(8)                        TTT    TTA    TTG    TTC

Phe    Ile    Val    Leu

        70     71     72     73

       Glu    Glu    Glu    Glu

       GAG    GAG    GAG    GAG

        TCC    TCA    TCG    TCT

        Pro    Thr    Ala    Ser

        74     75     76     77

12     Ile    Ile    Ile

Ile    ATA    ATA    ATA